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PCR实验室设计要求

PCR实验室要求 
1 实验室功能分区 
1.1 实验室原则上应分为4个独立工作区,实分三个独立工作区 
试剂准备区、样品处理区、扩增产物分析区,并设在不同房间。前两区为扩增前区,后区为扩增后区。各区的功能是:
1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。 
1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。 
1.1.3 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。 
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间有一定的间隔。 
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。 
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内: 
1.4.1 在生物安全柜内操作。 
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。 
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。 
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。推荐的程序是: 
(1)实验前将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除。 
(2)移入盛放污染材料的器皿、所需的试剂、耗材和样品,进行试验。 
(3)一个实验区域在同一时间段只进行一种实验。 
(4)实验结束后,移出个人材料至个人区域保管;封好污染材料盛放器皿并移至污物袋;移出共享器具至专门区域保管;将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除;打开紫外灯照射至少15min。 
1.5 各区域的仪器、设备、器具、工作服和试剂应为该区,不得交叉使用。 
2 人员 
进行HIV核酸检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。 
3 设施和设备 
3.1 根据检测项目配备相应的设施和设备。 
3.2 各区域的设施和设备应为区域性,开展特定试验时应根据要求在相应区域放置设备。以下是各区域应配备的设备: 
3.2.1 试剂准备区:冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、振荡器、废弃物容器。 
3.2.2 样品处理区:冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器。 
3.2.3 扩增产物分析区:冰箱、离心机、加样器、电泳仪、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、核酸污染物处理设备等。 
3.2.4 配备-80℃冰箱。 
3.3 各区域应备有工作人员的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套,必要时配备防护眼镜和/或口罩。 
1.1.1 PCR 实验室基本要求 
2.1 PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增产物分析等三个区域。只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可。各区域应完全独立分隔,不应有任何的空气直通。 
2.2 产物分析区或三个区域的zui后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。 
2.3 PCR实验室各区域仪器设备配备通常如下: 
2.3.1 试剂准备区: 
仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。
2.3.2 标本制备区 
仪器设备主要应有生物安全柜(为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果。此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。 
2.3.3 扩增产物分析区 
主要仪器就是核酸扩增热循环仪(PCR仪,实时荧光或普通的)。热循环仪的电源应,并配备一个稳压电源或UPS,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等。 
本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪和洗板机等。 
建议
在理想情况下,PCR实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。 
标准的PCR实验室简介 
1、 主体结构: 
主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。 
2、 标准的三区分隔和气压调节: 
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。 
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各 
扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、 消毒: 
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、 机械连锁不锈钢传递窗: 
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、 地面 
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。考虑成本也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。 
6、 照明 
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。

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